逆转录重组酶介导的等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒

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利用逆转录重组酶介导的等温扩增技术(Reverse transcription-recombinase aided amplification, RT-RAA)与RT-RAA单链荧光探针结合,建立甲型H1N1流感病毒(Influenza A virus H1N1, FLU A H1N1)的快速分子检测方法。设计RT-RAA引物和荧光探针,用于FLU A H1N1模板核酸的等温扩增和荧光检测,以评价优化方法的灵敏度与特异性;将实时荧光定量PCR(real-time PCR)作为对照方法,测试RT-RAA荧光方法对临床样本的检测效果。FLU A H1N1的RT-RAA荧光检测方法能在30 min内完成检测,灵敏度达到101拷贝/μL;特异性试验表明,其与十六种常见呼吸道传染性病毒均无交叉反应。49份临床样本检测结果和real-time PCR检测结果一致性高(Kappa=0.958),临床灵敏度为100%,临床特异性为95.2%。建立的RT-RAA荧光检测方法检测时间短,灵敏度高,特异性强,适用于FLU A H1N1的快速检测。
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