目的 优化敏感性及特异性更高的新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒,提高阳性检出率.并与市售试剂盒进行对比,对临床使用提出指导.方法 收集2020年1月至3月在山东大学附属济南市中心医院等6家2019-nCoV核酸检测单位的确诊患者88例及阴性患者572例,共计660例.通过对2019-nCoV的全基因组进行序列分析,设计更加灵敏的引物、探针,优化buffer配比及扩增过程.采用交叉实验及内源性物质干扰实验评价其特异性.另外选择3家市售核酸检测试剂盒,对梯度稀释的阳性核酸样本进行对比验证实验.结果 优化后的开放读码框1a/b(ORF1ab)、核衣壳蛋白(N)对于2019-nCoV的RNA靶点,比市售试剂盒具有更高的灵敏度.当核酸样本中1个病毒浓度为1个拷贝时即可检出,同时扩增曲线更加优越.相比较与世界卫生组织(WHO)或自行设计引物的试剂盒,ORF1ab的灵敏度提高了2倍(1:10 vs 1:5);而N基因的灵敏度比中国疾病预防控制中心(CDC)和自行设计引物的试剂盒提高了8倍(1:80 vs 1:10),比WHO试剂盒提高了2倍(1:80 vs 1:40).临床验证实验显示,鼻咽拭子检测准确度均为100％,与其他感染部位相同或感染症状相似的其他病原体无交叉反应,试剂盒的分析特异性为100％,阳性符合率和阴性符合率均为100％.结论 优化后的2019-nCoV核酸检测试剂盒具有更高的检测灵敏度和特异性,有助于解决核酸检测假阴性,提高阳性率,将对低病毒载量患者及出院患者的判定具有重要的意义.