融合蛋白IL6-OmpW的质粒构建及表达纯化

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以重组质粒pMD18-T/IL6和pMD18-T/OmpW为模板,分别扩增红笛鲷IL-6基因和哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW 基因,运用 PCR 重叠延伸剪切技术,将 IL-6和 OmpW 基因融合,将融合基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白高效表达,融合蛋白分子质量约为66.6 ku。优化后表达条件为温度37℃,IPTG 浓度0.2 mmol · L^-1,诱导时间5 h。用HisTrap^TM
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