【摘 要】
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为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达，参考GenBank中发布的RV N基因序列（登录号为1489853）,在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下，对该基因的密码子进行优化，化学合成N基因，并将其克隆至原核表达载体pET28a（+）中，构建重组质粒pET28a（+）/RV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达，利用His-tag镍柱进行重组RV N蛋白的纯
【基金项目】
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重庆市技术创新与应用示范专项（cstc2018jscxmszdX0049）； 重庆市巴南区科技计划项目（2020TJZ008）； 重庆理工大学研究生创新基金项目（lgycx 20202128）； 大学生创新创业训练计划项目（2021CX146;2021CX147;2021CX148）；
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为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达，参考GenBank中发布的RV N基因序列（登录号为1489853）,在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下，对该基因的密码子进行优化，化学合成N基因，并将其克隆至原核表达载体pET28a（+）中，构建重组质粒pET28a（+）/RV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达，利用His-tag镍柱进行重组RV N蛋白的纯化，对纯化后的RV N蛋白进行SDS-PAGE鉴定及Western blot分析。结果表明：重组质粒双酶切后在1 359 bp处有目的条带，经测序后与其所对应的已知基因序列完全相符，当重组菌在IPTG浓度0.1mmol/L、30℃诱导6 h, RV N蛋白表达量最高；经过镍柱纯化获得了RV N重组蛋白；BCA法测得重组RV N蛋白浓度达1.783 mg/mL;在51KD处可见明显的蛋白印迹，与预期目的条带相符；使用该方法成功在大肠杆菌系统高效表达了RV N蛋白，为后续狂犬病的检测与新型疫苗的研制奠定了基础。
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