【摘 要】
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目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型.方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP
【机 构】
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第一军医大学组织胚胎学教研室,广州,510515;第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室,上海,200433;四川大学华西医院眼科,成都,610041;
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目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型.方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定.纯化的pmROP-EGFP表达质粒经NotⅠ酶切线性化后,用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核,制作转基因小鼠.新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建者小鼠, 基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传代后, 取眼球进行冰冻切片, 在荧光显微镜下观察视网膜上GFP的表达.结果:从基因组内扩增出了2.1 kb的小鼠ROP,成功构建了小鼠ROP-GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP.获得了3只转基因小鼠首建者,分别命名为C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU21、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27.结论:成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠,它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制,还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型.
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