【摘 要】
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目的 观察胃癌组织肌球蛋白重链9(myosin heavy chain 9,MYH9)表达变化,探讨其对胃癌细胞增殖能力的影响.方法 自TCGA和GTEx数据库收集正常组织以及食管癌、胃癌、胆管癌、胶质瘤、急性髓系白血病、胰腺癌、胸腺瘤组织转录组测序数据,自TCGA数据库收集胃癌患者临床病理资料,比较不同癌组织与正常组织MYH9 mRNA相对表达量,分析MYH9表达与胃癌患者临床病理特征的关系.自Kaplan-MeierPlotter数据库收集胃癌患者生存资料,绘制Kaplan-Meier曲线,比较MYH
【机 构】
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郑州大学人民医院河南省人民医院肿瘤中心,河南郑州 450003
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目的 观察胃癌组织肌球蛋白重链9(myosin heavy chain 9,MYH9)表达变化,探讨其对胃癌细胞增殖能力的影响.方法 自TCGA和GTEx数据库收集正常组织以及食管癌、胃癌、胆管癌、胶质瘤、急性髓系白血病、胰腺癌、胸腺瘤组织转录组测序数据,自TCGA数据库收集胃癌患者临床病理资料,比较不同癌组织与正常组织MYH9 mRNA相对表达量,分析MYH9表达与胃癌患者临床病理特征的关系.自Kaplan-MeierPlotter数据库收集胃癌患者生存资料,绘制Kaplan-Meier曲线,比较MYH9高、低表达胃癌患者总生存率、首次进展生存率、进展后生存率.采用实时荧光定量PCR法检测人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1和胃癌AGS、SNU16、HGC27细胞MYH9 mRNA相对表达量,筛选出表达最高的胃癌AGS细胞.取对数生长期AGS细胞,分为NC组(转染siRNA-NC)、siMYH9-1组(转染siMYH9-1)、siMYH9-2组(转染siMYH9-2).转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测MYH9 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测MYH9蛋白相对表达量,采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,采用EdU实验检测EdU阳性细胞率;转染后培养0、24、48、72、96 h,采用CCK-8实验检测细胞增殖率.结果 数据库分析结果显示,胃癌组织MYH9 mRNA相对表达量高于正常组织(P＜0.05);T分期T3～T4期、组织学分级G3级的胃癌患者MYH9高表达比率分别高于T分期T1～T2期、组织学分级G1～G2级者(P＜0.05),不同性别、年龄以及有无幽门螺旋杆菌感染、胃癌家族史、淋巴结转移、远处转移的胃癌患者MYH9高表达比率比较差异均无统计学意义(P＞0.05);MYH9高表达的胃癌患者总生存率、首次进展生存率、进展后生存率均低于MYH9低表达MYH9者(P＜0.05).AGS(2 486.02±332.36)、SNU16(729.16±166.39)、HGC27(652.05±92.48)细胞 MYH9 mRNA 相对表达量均高于 CCC-HSF-1 细胞(1.00±0.11)(P＜0.05),SNU16、HGC27细胞 MYH9 mRNA 相对表达量均低于 AGS 细胞(P＜0.05).siMYH9-1 组、siMYH9-2组细胞 MYH9 mRNA(0.14±0.02、0.23±0.01)及蛋白(0.19±0.13、0.22±0.14)相对表达量、细胞克隆形成数目[(95.00±16.52)、(100.67±8.50)个]、EdU 阳性细胞率[(23.03±1.98)％、(27.07±1.89)％]均低于 NC 组(1.00±0.12、0.83±0.11、(325.67±26.69)个、(51.52±2.58)％)(P＜0.05),siMYH9-1 组细胞 MYH9 mRNA 相对表达量低于siMYH9-2组(P＜0.05),MYH9蛋白相对表达量、细胞克隆形成数目、EdU阳性细胞率与siMYH9-2组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).siMYH9-1 组、siMYH9-2组转染后培养48 h[(49.20±0.85)％,(73.33±1.16)％]、72 h[(45.94±0.43)％、(59.50±1.22)％]、96 h[(36.41±1.68)％、(47.24±0.29)％]时细胞增殖率均低于 NC 组[(100.00±0)％、(100.00±0)％、(100.00±0)％](P＜0.05),0、24 h时细胞增殖率与NC组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);siMYH9-2组转染后培养48、72、96 h 时细胞增殖率均高于 siMYH9-1 组(P＜0.05),0,24 h 时与 siMYH9-1组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 MYH9在胃癌组织中呈高表达,提示胃癌患者预后不良,敲低MYH9表达可抑制胃癌AGS细胞增殖.
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