双荧光素酶报告基因系统能够提供灵敏的读数,但该系统需要依赖组成型表达的内参对读数进行归一化。然而,大多数内参并不是在所有条件下都组成性表达。为此,我们建立了一个有效的方法制备适于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒。首先,突变Bm Vg P78启动子上的激素应答相关元件,获得了在家蚕细胞中稳定表达的组成型启动子Bm Vg P78M;然后,用Bm Vg P78M替换p RL-SV40质粒上的SV40启动子和嵌合内含子序列,成功构建了p RL-Vg P78M内参质粒;最后,通过细胞转染实验证实p RL-Vg P78M内参在家蚕细胞系中稳定表达,并且p RL-Vg P78M内参的表达活性不受蜕皮激素、保幼激素及激素相关转录因子的影响。最终,获得了在家蚕细胞中稳定表达且表达量适中的内参质粒p RL-Vg P78M。该内参可以有效地作为双荧光素酶报告基因系统的内参质粒用于家蚕细胞系中激素的研究。同时,该内参质粒的构建方法也为构建适于其他物种细胞系的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒提供了参考。