PCR对ES细胞定点整合重组子的鉴定

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PCR(polymerasechainreaction)是一种对ES(embryonicstem)细胞定点整合重组子进行鉴定的有效方法。由于在定点整合重组子和非定点整合重组子中外源导入基因与基因组DNA分子整合的方式各不相同。因此,非重组子、定点整合重组子和非定点整合重组子的基因组DNA分子结构也将各不相同。当我们设计合适的引物,从PCR扩增结果中即可分析、鉴别出定点整合重组子、非定点整合重组子、或非重组子。本文采用PCR方法,根据pRV4.0质粒转化ES细胞(雄性小鼠CCE株系)后的不同类型转化子细胞基因组DNA分子的特点,设计了两对不同的引物,分别对转化细胞经抗G418,6TG初步筛选的克隆进行了分析,从中快速、简便、特异性极强地得到了定点整合重组子。我们还用soutbern杂交验证了这种方法的准确性。
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