目的 了解胰岛素对烧伤血清诱导的血管内皮细胞NF-κB核移位的抑制作用及其相关机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）.按照随机数字表法将细胞分为5组：空白对照组,不加任何刺激因素常规培养;正常血清对照组和烧伤血清刺激组,分别用含体积分数20%健康人血清、体积分数20%烧伤患者血清的培养液培养;烧伤血清＋胰岛素处理组,在烧伤血清刺激组培养液成分的基础上添加胰岛素（终浓度1×10-7mol/L）进行培养;抑制剂预处理组,预先加入蛋白激酶B（PKB或Akt）特异性抑制剂LY294002（50μmol/L）孵育细胞,30 min后改用培养液（成分同烧伤血清＋胰岛素处理组）培养.6 h后,采用扫描电镜观察各组HUVEC损伤情况;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞胞质磷酸化κB-α抑制蛋白（p-IκB-α）和磷酸化Akt（p-Akt）水平,以及胞核NF-κB-p65的蛋白表达变化.结果 （1）扫描电镜观察：与空白对照组HUVEC比较,烧伤血清刺激组、抑制剂预处理组细胞收缩明显,细胞间呈锯齿状连接或连接消失,胞核结构不规整.正常血清对照组及烧伤血清＋胰岛素处理组细胞结构有轻微改变,但细胞延展性及胞核结构明显好于烧伤血清刺激组.（2）细胞凋亡率：空白对照组为（15.7±2.2）%.烧伤血清刺激组为（28.5±2.3）%,烧伤血清＋胰岛素处理组为（22.3±1.8）%,抑制剂预处理组为（29.7±2.4）%,均明显高于空白对照组（F=14.288,P〈0.05或P〈0.01）;正常血清对照组细胞凋亡率为（17.0±2.5）%,与空白对照组比较差异无统计学意义（F=14.288,P〉0.05）.与烧伤血清刺激组相比,烧伤血清＋胰岛素处理组细胞凋亡率明显降低（F=14.288,P〈0.05）.（3）蛋白表达水平：与空白对照组相比,烧伤血清刺激组和抑制剂预处理组细胞胞质p-IκB-α与胞核NF-κB-p65的蛋白表达水平明显升高,p-Akt表达水平明显下降;正常血清对照组和烧伤血清＋胰岛素处理组3种蛋白水平均与空白对照组接近.结论 胰岛素通过调节磷脂酰肌醇3激酶/Akt信号通路抑制IκB-α磷酸化,继而限制NF-κB核移位,最终发挥改善内皮细胞功能的作用.
胰岛素对烧伤血清诱导血管内皮细胞核因子κB核移位的抑制作用
【摘 要】
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目的 了解胰岛素对烧伤血清诱导的血管内皮细胞NF-κB核移位的抑制作用及其相关机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）.按照随机数字表法将细胞分为5组：空白对照组,不加任何刺激因素常规培养;正常血清对照组和烧伤血清刺激组,分别用含体积分数20%健康人血清、体积分数20%烧伤患者血清的培养液培养;烧伤血清＋胰岛素处理组,在烧伤血清刺激组培养液成分的基础上添加胰岛素（终浓度1×10-7mol
【机 构】
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第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西安710032,第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西安710032,第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西安710032,第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西
【发表日期】
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2010年26期
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