多药耐药基因MDR1慢病毒表达载体的构建、病毒包装及功能验证

来源 :医学分子生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jackind
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目的 构建MDR1基因的过表达慢病毒载体并进行病毒的包装,为进一步深入的研究MDR1基因在乳腺癌耐药中的作用提供基础工具.方法用PCR 技术获得MDR1基因片段,将其连接入酶切后的慢病毒载体,转化感受态进行PCR及测序鉴定,脂质体转染293T细胞,包装成慢病毒再分别感染靶细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞验证其生物学功能.结果 成功构建MDR1慢病毒表达载体,测序证实所获取基因序列完全正确,Western印迹验证在乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7稳转MDR1细胞系中MDR1基因高表达.通过药物杀伤实验验证稳转MDR1细胞组较对照组耐药性显著增高.结论 MDR1慢病毒表达载体的成功构建及病毒包装完成为进一步深入研究MDR1基因在乳腺癌多药耐药过程中的作用奠定了基础.
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