【摘 要】
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目的研究TRAIL诱导的黑色素瘤细胞中miRNA-221的表达及其在细胞凋亡抵抗中的意义。方法 TRAIL(100μg/L)分别处理黑色素瘤细胞系sk-Mel-28、IgR3、Mel-RM、MM200、Me4405,6 h
【机 构】
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安徽医科大学免疫学教研室,合肥微尺度物质科学国家实验室
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目的研究TRAIL诱导的黑色素瘤细胞中miRNA-221的表达及其在细胞凋亡抵抗中的意义。方法 TRAIL(100μg/L)分别处理黑色素瘤细胞系sk-Mel-28、IgR3、Mel-RM、MM200、Me4405,6 h后收集细胞,实时荧光定量PCR检测各细胞系中miRNA-221的mRNA水平,同时检测TRAIL(100μg/L)诱导Mel-RM细胞不同时间点miRNA-221的mRNA水平变化;脂质体转染反义miRNA-221下调TRAIL诱导的Mel-RM细胞中miRNA-221的表达,同时设对照组和转染无意序列组;流式细胞术PI单染法检测细胞凋亡率;Western blot检测p-ERK及p27蛋白表达。结果 TRAIL(100μg/L)诱导Mel-RM细胞中miRNA-221的mRNA水平明显高于其他细胞系(2-ΔΔCt值为18.553 4±1.514 6)。随TRAIL诱导时间的延长,Mel-RM细胞中miRNA-221的表达上调。TRAIL(100μg/L)诱导的Mel-RM细胞中,反义miR-NA-22l转染组凋亡率高于对照组和转染无意序列组。miR-NA-221靶基因p27在U0126(MEK1/2抑制剂)和TRAIL共处理的Mel-RM细胞中的表达较TRAIL单独处理组上调。结论抑制miRNA-221的表达可能具有提高TRAIL诱导的黑色素瘤细胞凋亡敏感性的作用,抑制ERK的激活可能下调miRNA-221的表达,从而上调miRNA-221的靶基因p27蛋白的表达。
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