【摘 要】
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目的 探讨上调富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)表达对非小细胞肺癌A549白蛋白结合型紫杉醇敏感性的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和特异性甲基化PCR法检
【机 构】
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内蒙古医科大学附属医院肿瘤内科,呼和浩特,010000
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目的 探讨上调富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)表达对非小细胞肺癌A549白蛋白结合型紫杉醇敏感性的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和特异性甲基化PCR法检测白蛋白结合型紫杉醇对A549细胞SPARC基因表达的影响.分别设置空白对照组(未作任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照序列)和SPARC组(转染SPARC序列),分别采用噻唑蓝、流式细胞术、Transwell小室法和划痕实验检测白蛋白结合型紫杉醇对过表达SPARC A549细胞生物学行为的影响.采用蛋白质印迹法检测过表达SPARC对A549细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、剪切的多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARp)蛋白表达的影响.结果 经特异性甲基化PCR法检测,白蛋白结合型紫杉醇可逆转A549细胞SPARC基因启动子区高甲基化状态,并增加SPARC mRNA表达量(1.44±0.23),较处理前(1.00±0.00)明显升高(t=4.962,P＜0.001).经不同浓度白蛋白结合型紫杉醇(0.01、0.1、1、10、100、1 000 mg/L)作用于SPARC组A549细胞后,增殖抑制率分别为(2.88±0.18)％、(10.96±1.23)％、(19.35±2.14)％、(48.97±5.31)％、(72.73±8.91)％、(75.46±8.26)％,从1 mg/L起SPARC组高于空白对照组和阴性对照组(均P ＜0.05).白蛋白结合型紫杉醇作用于SPARC组细胞,其凋亡率、侵袭率和迁移率分别为(23±3)％、(33±12)％、(51±15)％,与空白对照组和阴性对照组相比,SPARC组A549细胞凋亡率更高,侵袭率和迁移率降低(均P ＜0.05).另外,上调SPARC蛋白表达后,SPARC组A549细胞caspase-2、caspase-8、剪切的PARP蛋白表达量分别为(0.93±0.15)、(2.11±0.34)、(1.08±0.17),明显高于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).结论 上调SPARC可增加A549对白蛋白结合型紫杉醇的敏感性,可能与降低SPARC基因启动子甲基化状态有关.
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