过表达富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白对非小细胞肺癌细胞白蛋白结合型紫杉醇敏感性的影响

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目的 探讨上调富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)表达对非小细胞肺癌A549白蛋白结合型紫杉醇敏感性的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和特异性甲基化PCR法检测白蛋白结合型紫杉醇对A549细胞SPARC基因表达的影响.分别设置空白对照组(未作任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照序列)和SPARC组(转染SPARC序列),分别采用噻唑蓝、流式细胞术、Transwell小室法和划痕实验检测白蛋白结合型紫杉醇对过表达SPARC A549细胞生物学行为的影响.采用蛋白质印迹法检测过表达SPARC对A549细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、剪切的多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARp)蛋白表达的影响.结果 经特异性甲基化PCR法检测,白蛋白结合型紫杉醇可逆转A549细胞SPARC基因启动子区高甲基化状态,并增加SPARC mRNA表达量(1.44±0.23),较处理前(1.00±0.00)明显升高(t=4.962,P<0.001).经不同浓度白蛋白结合型紫杉醇(0.01、0.1、1、10、100、1 000 mg/L)作用于SPARC组A549细胞后,增殖抑制率分别为(2.88±0.18)%、(10.96±1.23)%、(19.35±2.14)%、(48.97±5.31)%、(72.73±8.91)%、(75.46±8.26)%,从1 mg/L起SPARC组高于空白对照组和阴性对照组(均P <0.05).白蛋白结合型紫杉醇作用于SPARC组细胞,其凋亡率、侵袭率和迁移率分别为(23±3)%、(33±12)%、(51±15)%,与空白对照组和阴性对照组相比,SPARC组A549细胞凋亡率更高,侵袭率和迁移率降低(均P <0.05).另外,上调SPARC蛋白表达后,SPARC组A549细胞caspase-2、caspase-8、剪切的PARP蛋白表达量分别为(0.93±0.15)、(2.11±0.34)、(1.08±0.17),明显高于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05).结论 上调SPARC可增加A549对白蛋白结合型紫杉醇的敏感性,可能与降低SPARC基因启动子甲基化状态有关.
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