目的建立液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测法同时测定人血浆及脑脊液样品中头孢哌酮和舒巴坦的浓度。方法用HPLC-MS/MS法,以倒千里光碱、葛根素为内标,色谱柱ACE Excel 3 C₁₈-PFP（150 mm×4. 6 mm,1. 7μm）进行分离,血浆样品流动相A为0. 1%甲酸-水溶液,B为0. 1%甲酸-乙腈溶液,脑脊液样品流动相A为0. 1%甲酸-水溶液,B为0. 1%甲酸-乙腈溶液。用于定量分析的离子对分别为m/z 646. 2→m/z 143. 2（头孢哌酮）和m/z352. 1→m/z 290. 0（倒千里光碱）; m/z 232. 2→m/z 140. 1（舒巴坦）和m/z 415. 1→m/z 266. 9（葛根素）。结果脑脊液样品中头孢哌酮、舒巴坦保留时间分别为6. 47,5. 56 min,在0. 4×10^-2～2μg·mL^-1线性关系良好（r=0. 997 8,0. 9992）,最低检测浓度为0. 4×10^-2μg·mL^-1;血浆样品中头孢哌酮、舒巴坦保留时间分别为6. 52,5. 56 min,在0. 4×10^-2～2μg·mL^-1线性关系良好（r=0. 9968,0. 998 4）,最低检测浓度为0. 4×10^-2μg·mL^-1;脑脊液及血浆中头孢哌酮日内、日间精密度RSD均<12%;方法回收率> 95%,提取回收率> 93%;舒巴坦日内、日间精密度RSD均<10%;方法回收率> 96%,提取回收率> 98%。结论该方法快速、简便、准确、灵敏,适用于人血浆和脑脊液中头孢哌酮和舒巴坦的含量测定。