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目的
探索喉癌肿瘤干细胞的分选方法。
方法联合应用藻红蛋白标记的CD133单抗、侧群细胞(side population,SP)分选及流式细胞仪荧光活化细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133^+ SP及CD133SP细胞,在体外对2个亚群细胞进行肿瘤干细胞特性相关的增殖、分化、球体形成及药物敏感性试验并进行比较。
结果CD133^+SP细胞在喉癌Hep-2细胞系中占(0.30±0.12)%,远低于CD133^+亚群(3.15±0.83)%及sP亚群(17.1±2.0)%。在体外增殖实验中CD133^+SP较CD133^-SP细胞表现出更强的增殖能力;纯化的CD133^+SP细胞体外培养后可以分化出CD133^-SP细胞及非SP细胞,而CD133^-SP却不能分化成CD133^+SP;CD133^+SP在含生长因子的无血清培养基中可以形成悬浮生长的球体;CD133^+SP较CD133^-SP有更强的化疗抵抗力。
结论CD133^+SP较CD133^-SP具备更明显的肿瘤干细胞特性,较CD133^+亚群及SP亚群更有效地富集了喉癌肿瘤干细胞,可作为喉癌肿瘤干细胞研究的理想候选亚群。