探讨微小RNA-1291(miR-1291)对肾癌细胞中锌指蛋白8(PHF8)基因表达的调控作用和对肾癌细胞周期及增殖的影响。

实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞株OS-RC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞HK-2中miR-1291表达水平，以表达量最低的肾癌细胞株为实验对象分别转染miR-1291(miR-1291组)和miR-NC(miR-NC组)。qRT-PCR检测转染后细胞中miR-1291和PHF8 mRNA的表达水平。Western blotting检测PHF8、细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)和Cyclin D1蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因系统检测miR-1291对PHF8转录活性的影响。流式细胞术检测细胞周期分布。四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和集落形成实验分别检测细胞活力和增殖能力。

肾癌细胞株OS-RC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞HK-2中miR-1291的表达量分别为0.64±0.17、0.60±0.15、0.29±0.08、0.63±0.08、1.01±0.17，差异有统计学意义(F＝13.790，P<0.001)。与肾癌细胞株OS-RC-2、ACHN、786-O相比，A498细胞株中的miR-1291表达量最低(P＝0.002，P＝0.006，P＝0.003)。转染后的miR-NC组和miR-1291组A498细胞中miR-1291表达量分别为1.00±0.03和775.25±329.91，差异有统计学意义(t＝4.694，P＝0.003)；PHF8 mRNA表达量分别为1.00±0.11和0.57±0.18，差异有统计学意义(t＝4.122，P＝0.006)。Western blo-tting实验结果与qRT-PCR结果一致，且CDK6和Cyclin D1蛋白表达明显降低。双荧光素酶报告基因显示miR-1291可以直接作用于靶基因PHF8的3′-非翻译区，抑制荧光素酶活性。与miR-NC组比较，转染miR-1291后肾癌细胞在S期(23.40±4.29∶32.19±2.64，t＝3.491，P＝0.013)和G₂-M期(14.38±4.05∶25.59±6.01，t＝3.095，P＝0.021)的细胞比例下降，在G₀-G₁期的细胞比例升高(62.22±7.56∶42.22±5.23，t＝4.351，P＝0.005)。MTT实验显示，转染miR-1291的细胞活力明显下降。集落形成实验显示，A498细胞在miR-NC组和miR-1291组形成的集落数分别为246.64±39.94和87.34±21.93，差异有统计学意义(t＝6.993，P<0.001)。

miR-1291在肾癌细胞株中表达显著下降，miR-1291可通过靶向干扰PHF8基因的表达显著抑制肾癌细胞的增殖，可能有助于开发新的肾癌治疗靶点。