本研究旨在亚克隆HLAE真核表达载体,并使其在HLAI类阴性的靶细胞K562细胞上获得稳定表达。首先采用PCR方法从多顺反子表达载体(pG/A2E)扩增出目的片段A2/EcDNA,与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,构建成HLAE真核表达载体pcDNA3.1(+)/A2E,然后采用脂质体转染的方法将重组质粒转入K562细胞,最后经G418筛选及有限稀释,利用抗HLAE特异的单克隆抗体K01263进行FACS检测,以观察HLAE分子在靶细胞表面的表达情况。结果显示,HLAE分子在经pcDNA3.1(+)/A2E转染的靶细胞表面获得表达(27.76%),而经空载体pcDNA3.1(+)转染的靶细胞则未获得表达。结论:成功构建了pcDNA3.1(+)/A2E真核表达载体,并使HLAE分子在HLAI类阴性的K562细胞表面表达,为进一步研究HLAE作用的分子机制以及探索HLAE与NK受体之间的相互作用和HLAE体外表达对NK细胞功能的影响奠定了基础。