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目的
探讨凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin-1, TSP-1)和核因子κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)信号通路在普萘洛尔对血管瘤内皮细胞抑制机制中的作用,完善普萘洛尔治疗血管瘤机制,为其临床治疗提供新靶点。
方法手术获取增生期血管瘤标本,孵育消化制成细胞悬液,流式细胞仪分选出CD31阳性血管瘤内皮细胞传代培养。加入不同浓度普萘洛尔(0、25、50、100、150、200、250 μmol/L)溶液,培养24 h、48 h及72 h后,分别加入CCK-8培养液和BrdU标记液,酶标仪检测450 nm处吸光度判定细胞活性和增殖情况;Western blot检测普萘洛尔干预前后TSP-1及NF-κB通路蛋白表达情况;细胞荧光双标后,激光共聚焦显微镜观察干预前后TSP-1和NF-κB通路激活失活情况。所有数据应用SPSS 13.0统计软件进行分析。
结果流式细胞仪分选CD31阳性细胞率达98.0%。加入普萘洛尔后,随着培养时间延长,细胞活性和增殖状态受抑越明显。普萘洛尔浓度达100~150 μmol/L时,细胞活性和增殖开始明显受抑,和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),以72 h时为著;TSP-1及其受体CD36表达量随着普萘洛尔浓度的增加逐渐增多,而NF-κBp65及p-IκBα、p-IKKβ表达量开始逐渐减少(P<0.05)。两个通路存在负向调控,TSP-1逐渐激活时,NF-κBp65逐渐失活。
结论普萘洛尔可能通过促进TSP-1诱导的血管生成抑制和/或阻断NF-κB介导的促血管生成来治疗婴幼儿血管瘤,两个通路存在负向调控作用。