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自动调光是全自动显微成像中的一项关键技术。为了解决已有调光算法空白视野失效、不能实时处理图像和调光精度低等问题,本文从分析清晰度评价函数随光源亮度变化曲线入手,验证了这类函数的调光性能。根据光学显微镜的成像原理和观测目标的特点,考虑与图像清晰度无关、仅与图像亮度信息有关的变量,提出了利用空白区域的灰度均值寻找最优光亮度的算法。通过人工训练样本方式获取最优灰度均值,最后通过单变量寻优法得到最优光源亮度。基于自行研发的全自动显微镜系统对本文算法进行了验证,实验结果证明了算法的有效性。