【摘 要】
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根据NCBI发表ECV核衣壳基因序列,用PCR方法扩增出ECV核衣壳基因片段,插入表达型载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-ECV-N。以IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE凝胶电泳分析,结果成
【机 构】
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南通出入境检验检疫局; 国家质检总局; 江苏出入境检验检设局; 北京出入境检验检疫局; 扬州大学; 扬州大学 江苏南通226005; 北京1
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根据NCBI发表ECV核衣壳基因序列,用PCR方法扩增出ECV核衣壳基因片段,插入表达型载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-ECV-N。以IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE凝胶电泳分析,结果成功表达了42KD GST-ECV-N融合蛋白。将ECV-N从pGEX-ECV-N载体亚克隆到的杆状病毒转移载体pFastBac1,筛选出重组转移载体pFastBac-ECV-N,在DH1O细菌的转座子作用下,构建重组穿梭质粒Bacmid-ECV-N。提取正确重组的穿梭质粒DNA转染Sf9昆虫细胞,结果获得了重组杆状病毒rBac-ECV-N。PCR和间接免疫荧光试验结果证明,ECV-N在Sf9细胞中得到了很好的表达。该结果对我国马群中冠状病毒感染的流行病学调查及深入研究有指导意义。
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