【摘 要】
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目的:构建哮喘相关同源异型盒基因1(sine oculis homeobox homolog 1,Six1)启动子片段的荧光素酶报告质粒,以预测功能性转录因子结合位点,并研究E2F转录因子4(E2F transcription factor 4,E2F4)对哮喘相关基因Six1的影响及其机制.方法:将Six1基因启动子片段(-351～+100nt)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,获得Six1基因启动子荧光素酶报告质粒pSix1-451.通过双荧光素酶报告基因系统测定Six1基因启动子片段在
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院儿科,江苏 南京 210029
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目的:构建哮喘相关同源异型盒基因1(sine oculis homeobox homolog 1,Six1)启动子片段的荧光素酶报告质粒,以预测功能性转录因子结合位点,并研究E2F转录因子4(E2F transcription factor 4,E2F4)对哮喘相关基因Six1的影响及其机制.方法:将Six1基因启动子片段(-351～+100nt)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,获得Six1基因启动子荧光素酶报告质粒pSix1-451.通过双荧光素酶报告基因系统测定Six1基因启动子片段在HEK-293和BEAS-2B细胞中的活性,并使用生物学手段预测其潜在的转录因子结合位点.将pSix1-451与E2F4小干扰或过表达质粒共转染至HEK-293和BEAS-2B细胞后,检测其荧光素酶活性以确定E2F4对Six1基因的启动作用.通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验观察敲低和过表达E2F4后对Six1基因表达量的影响.结果:成功构建有活性的Six1启动子片段荧光素酶报告质粒,且在此片段内含有E2F4等转录因子结合位点.转录因子E2F4在启动子、mRNA及蛋白水平对Six1存在正向调控.结论:转录因子E2F4对哮喘相关基因Six1存在正向转录调控.
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