【摘 要】
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目的 建立并评估基于微流控芯片（MC）技术检测布鲁氏菌（简称布氏菌）核酸的方法，以提高布鲁氏病（简称布病）的诊断能力。方法 设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程。设计微流控全自动核酸检测（MC-PCR）与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测（qPCR）、TaqMan探针法检测比较实验；评估MC-PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最
【机 构】
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内蒙古民族大学第二临床学院内蒙古通辽市科尔沁区第一人民医院检验科
【基金项目】
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内蒙古自治区卫生健康科技计划项目（202201609）；
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目的 建立并评估基于微流控芯片（MC）技术检测布鲁氏菌（简称布氏菌）核酸的方法，以提高布鲁氏病（简称布病）的诊断能力。方法 设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程。设计微流控全自动核酸检测（MC-PCR）与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测（qPCR）、TaqMan探针法检测比较实验；评估MC-PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限。结果 研究组与对照组核酸溶解曲线图纵坐标峰值所对应的横坐标一致，呈现单一的溶解峰，温度相同，表示为相同的扩增产物。核酸不同提取方法之间Ct值差异有统计学意义（P<0.05）。经两两比较，NaI（机提）的Ct值低于AXYGEN、天净沙、济凡、NaI（手提），差异有统计学意义（P0.05）。基因测序的Kappa值为0.659，与MC-PCR具有高度的一致性，MC-PCR与基因测序阳性结果符合率100%，总符合率82.5%。准确性：结果符合率为100%；特异性：结果阴性率100%；重复性：结果均可以检出布氏菌；检出限：浓度为825 copies/mL时，MC-PCR与qPCR、TaqMan探针法检出率差异有统计学意义（χ2=24.699,P<0.05），经两两比较，MC-PCR检出率高于qPCR和TaqMan探针法。精密度：结果均可以检出布氏菌。结论 MC-PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准，可以应用于临床。这将提高布病诊断率，对布鲁氏菌病的防治起到重要作用。
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