【摘 要】
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应用RD-PCR技术分离SH-SY5Y细胞的基因片段.从正常培养的SH-SY5Y细胞中提取总RNA,经oligo(dT)纤维素柱纯化分离出mRNA,然后以oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以
【机 构】
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第一军医大学生化教研室,广州军区总医院分子肿瘤研究所
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应用RD-PCR技术分离SH-SY5Y细胞的基因片段.从正常培养的SH-SY5Y细胞中提取总RNA,经oligo(dT)纤维素柱纯化分离出mRNA,然后以oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3AI酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物进行扩增;然后与载体pMD18-T相连, 克隆鉴定、筛选、测序.所分离的cDNA片段经过扩增后用于制备基因芯片的靶基因,杂交检测的结果表明,此种方法所分离的基因片段可以用于基因芯片的靶基因片段,所制
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