【摘 要】
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目的 探讨胶质瘤干细胞(glioma stem—like cells,GSCs)来源的外泌体(exosome)中微小RNA—574-5p(miR—574-5p)的表达水平及其对胶质瘤细胞侵袭能力的影响.方法 利用神经细胞球培养法分离恶性胶质瘤细胞系U87来源的胶质瘤干细胞(GSCs),并用免疫荧光染色鉴定其表面标志物.收集胶质瘤干细胞上清液并提取其中的外泌体(GSCs—Exosome),利用深度测序技术分析其中不同微小RNA的表达水平.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证测序结果.利用靶向miR—57
【机 构】
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230001合肥 安徽医科大学附属安徽省立医院神经外科;中国科学技术大学附属第一医院神经外科、脑功能与脑疾病安徽省重点实验室、安徽省脑立体定向神经外科研究所;230001合肥 安徽医科大学附属安徽省立
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目的 探讨胶质瘤干细胞(glioma stem—like cells,GSCs)来源的外泌体(exosome)中微小RNA—574-5p(miR—574-5p)的表达水平及其对胶质瘤细胞侵袭能力的影响.方法 利用神经细胞球培养法分离恶性胶质瘤细胞系U87来源的胶质瘤干细胞(GSCs),并用免疫荧光染色鉴定其表面标志物.收集胶质瘤干细胞上清液并提取其中的外泌体(GSCs—Exosome),利用深度测序技术分析其中不同微小RNA的表达水平.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证测序结果.利用靶向miR—574-5p的特异性模拟物及抑制剂转染胶质瘤细胞调控miR—574-5p的表达水平.应用细胞划痕、Transwell实验分别检测GSCs—Exosome及不同miR—574-5p含量对胶质瘤细胞侵袭及迁移能力的影响.结果 肿瘤球于神经干细胞培养基中呈悬浮生长,免疫荧光染色证实其特异性表达肿瘤干细胞标志物CD133及神经细胞标志物Nestin.胶质瘤干细胞来源的外泌体中miR—574-5p的含量明显高于人脑正常胶质细胞来源的外泌体,RT—qPCR验证测序结果可靠(均P＜0.001).与对照组相比,GSCss—Exosomes处理的胶质瘤细胞侵袭及迁移能力明显增强(均P＜0.05).此外,过表达miR—574-5p同样明显促进肿瘤细胞侵袭及迁移能力,而抑制miR—574-5p则抑制其侵袭能力(均P＜0.05).结论 微小RNA—574-5p在胶质瘤干细胞来源的外泌体中高表达,胶质瘤干细胞外泌体及miR—574-5p均明显促进胶质瘤细胞侵袭及迁移能力.因此,外泌体中微小RNA—574-5p可能作为胶质瘤治疗的新靶点.
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