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根据已发表的鹅细小病毒(GPV)核苷酸序列设计并合成了1对引物,对GPV主要结构蛋白VP2和VP3基因进行扩增.所获得的PCR产物与预期片段大小相符,约1.8 kb.将该片段直接与真核表达pCR3.1 T载体连接,转化入感受态大肠杆菌TOP10F′中增殖.在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及BamHⅠ酶切线性化初步鉴定的基础上,经限制性内切酶ScaⅠ和EcoRⅤ分别酶切进行正反向鉴定,获得了3个正向插入的克隆(PVPA)和2个反向插入的克隆(PVPB).将正向插入的克隆PVPA1与原核表达载体 pET-28b(+)分别用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,回收目的片段进行定向连接,并转化入感受态大肠杆菌DH5α中.对所获得的重组质粒分别经ScaⅠ、EcoRⅤ、BamHⅠ/XhoⅠ酶切,证实含有目的基因,且基因插入方向正确,成功地构建了含有GPV主要结构蛋白基因的原核表达载体,为高效原核表达以及研制更为有效的基因工程疫苗打下了基础.