【摘 要】
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本试验旨在研究丁酸梭菌(CB)缓解猪霍乱沙门氏菌(SC)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC?J2细胞)氧化损伤的分子机制.选用IPEC?J2细胞为模型,采用CCK?8法检测细胞活力,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和丙二醛(MDA)含量,从而筛选诱导IPEC?J2细胞氧化损伤的SC适宜剂量.CB预处理细胞后,用SC感染细胞,通过小干扰RNA(siRNA)沉默IPEC?J2细胞中核因子E2相关因子(Nrf2)的表达以及p38丝裂原活化
【机 构】
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天津师范大学生命科学学院,天津市动物多样性保护与利用重点实验室,天津 300387;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津 300384
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本试验旨在研究丁酸梭菌(CB)缓解猪霍乱沙门氏菌(SC)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC?J2细胞)氧化损伤的分子机制.选用IPEC?J2细胞为模型,采用CCK?8法检测细胞活力,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和丙二醛(MDA)含量,从而筛选诱导IPEC?J2细胞氧化损伤的SC适宜剂量.CB预处理细胞后,用SC感染细胞,通过小干扰RNA(siRNA)沉默IPEC?J2细胞中核因子E2相关因子(Nrf2)的表达以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂处理细胞,用实时荧光定量PCR(RT?qPCR)法检测细胞中p38 MAPK、SOD1、SOD2、GPX1、GPX2和Nrf2的mRNA相对表达量,蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞中p38 MAPK和Nrf2蛋白相对表达量.结果表明,CCK?8法和ELISA法确定1×103 CFU/mL为SC诱导IPEC?J2细胞氧化损伤的适宜剂量.与SC组相比,CB+SC组细胞中p38 MAPK、Nrf2及其下游基因在12 h后的mRNA相对表达量均极显著升高(P<0.01).与对照组相比,siRNA沉默Nrf2基因后,siRNA组培养上清液GPX活性以及细胞中抗氧化酶基因的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05);与siRNA+SC组相比,NC+CB+SC组和siRNA+CB+SC组细胞中抗氧化酶基因的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05).p38 MAPK被抑制后,与p38+SC组相比,p38+CB+SC组培养上清液GPX活性以及细胞中抗氧化酶基因的mRNA相对表达量均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01).综上所述,CB通过激活p38 MAPK/Nrf2信号通路抗氧化相关基因的表达,缓解SC造成的IPEC?J2细胞氧化损伤.
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