【摘 要】
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为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗，并对其进行免疫效果评价。本研究将五种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21（DE3）中制备伴侣感受态细胞，将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a（+）-HBcAg-BCoV S1+S2转化至制备好的五种分子伴侣感受态细胞中，各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后，通过SDS
【基金项目】
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河北农业大学精准畜牧学科群建设项目（1090064）； 河北省农业产业技术体系奶牛创新团队项目（HBCT2018120406）； 河北省农业产业技术体系肉牛创新团队项目（HBCT2018130405）；
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为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗，并对其进行免疫效果评价。本研究将五种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21（DE3）中制备伴侣感受态细胞，将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a（+）-HBcAg-BCoV S1+S2转化至制备好的五种分子伴侣感受态细胞中，各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后，通过SDS-PAGE检测上清是否表达来筛选有效的伴侣质粒。从诱导时间和诱导剂浓度选择最佳表达条件。纯化共表达的重组蛋白，利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒（VLPs）。用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠，采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平。结果显示成功制备上清表达的BCoV VLPs，将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠，小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组（P＜0.05）。结果表明分子伴侣pG-KJE8可以在16℃更好的促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达，且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性，对制备廉价高效的牛冠状病毒样颗粒疫苗具有重要意义。
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