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以刺槐未成熟合子胚的愈伤组织为材料，试验通过正交试验设计，对酶液质量分数（纤维素酶R－10、果胶酶Y－23、离析酶R－10）、分离时间和分离液渗透压（即甘露醇质量分数）3个影响因素分析，并采用蔗糖等密度离心法中的上浮法纯化后，得到分离最佳条件：纤维素酶R－10质量分数为2．5％，果胶酶Y－23质量分数0．6％和离析酶R－10质量分数1％，甘露醇质量分数11％，酶解时间10 h。在此条件下，原生质体产量达22．4×106个/mL，活力为92．13％，原生质体净得率为2．06×106个/mL。在此基础上，采用PEG诱导法，对原生质体的融合时间和融合剂PEG6000质量分数等相关影响因素进行了相关探讨，结果表明最佳融合条件为25％的PEG6000诱导下，融合30 min，融合率达到10．97％。