溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核载体构建、表达条件优化及多克隆抗体制备

来源 :华北农学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lvy_yvl2009

【摘要】

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为构建水产致病菌溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核表达载体，优化ACFA蛋白的诱导表达条件，制备ACFA蛋白小鼠多克隆抗体。通过分子克隆获得ACFA蛋白的表达菌株，利用切胶纯化获得ACFA

【作者】

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刘祥

【机构】

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陕西理工学院生物科学与工程学院

【出处】

：

华北农学报

【发表日期】

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2015年1期

【关键词】

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溶藻弧菌 ACFA蛋白正交试验多克隆抗体 Vibrio alginolyticus ACFA protein Orthogonal experiment P

【基金项目】

：

陕西省教育厅科学研究计划项目（2013JK0723）,陕西理工学院人才启动项目（SLGQD13-15）

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为构建水产致病菌溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核表达载体，优化ACFA蛋白的诱导表达条件，制备ACFA蛋白小鼠多克隆抗体。通过分子克隆获得ACFA蛋白的表达菌株，利用切胶纯化获得ACFA蛋白，免疫小鼠制备多克隆抗体，采用ELISA法检测抗体滴度为1∶3200倍， Western-Blotting法检测抗血清特异性较好。通过正交试验，获得ACFA菌株的最佳表达条件为：诱导时菌液OD600值0．5，加IPTG终浓度0．3 mmol／L，诱导时间8 h，诱导温度32℃；最佳培养条件为：葡萄糖浓度0，转速230

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