【摘 要】
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试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制.分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS对细胞进行炎性刺激12 h.用CCK8法检测不同浓度烟碱(5、10和20μg/mL)对细胞存活率的影响,筛选合适浓度的烟碱进行后续试验.将细胞分为对照组(CON)、LPS、LPS+烟碱、LPS+烟碱+甲基牛扁碱(
【机 构】
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内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018;内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010018;农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018
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试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制.分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS对细胞进行炎性刺激12 h.用CCK8法检测不同浓度烟碱(5、10和20μg/mL)对细胞存活率的影响,筛选合适浓度的烟碱进行后续试验.将细胞分为对照组(CON)、LPS、LPS+烟碱、LPS+烟碱+甲基牛扁碱(MLA)(α7nAChR的特异性颉颃剂)组,通过ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、前列腺素E2 (prostaglandin E2,PGE2)和前列腺素F2α(PGF2α)的含量.试验成功分离兔子宫内膜上皮细胞,且传至第5代仍保持良好的生长状态.CCK8检测结果显示,20 μg/mL烟碱组细胞存活率显著降低(P＜0.05),10 μg/mL烟碱对细胞存活率无显著影响(P＞0.05),所以选择10 μ g/mL烟碱进行后续试验.ELISA结果显示,与对照组相比,LPS组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α的含量显著增加(P＜0.05);与LPS组相比,LPS+烟碱组显著降低IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α的含量(P＜0.05),LPS+烟碱+MLA组炎性因子和前列腺素的含量差异不显著(P＜0.05).以上结果表明,烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE2和PGF2α具有下调作用,推测烟碱通过α7nAChR介导炎性因子和前列腺素分泌下调而发挥抗炎作用,该结果可为研究α7nAChR作为子宫内膜炎治疗靶点的药物选择提供参考.
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