研究建立同时进行HBV DNA定量与基因分型检测的双重分子信标实时PCR法（以下简称“定量与分型PCR法”），并探讨其应用价值。

构建B、C基因型重组质粒作为标准品，通过设计B、C基因型特异性引物和分子信标（B、C基因型分子信标5′端分别标记FAM和Hex荧光基团），建立在1个反应体系中同时定量与分型PCR法。然后，用10倍梯度稀释的B、C基因型标准品（10³~10¹¹kIU/L）评价其检测线性范围和灵敏度；用丙型肝炎病毒感染者、单纯疱疹病毒感染者、人类乳头瘤病毒感染者、健康志愿者血清各5份评价其检测特异性；用高、中、低3份不同浓度的B、C基因型质粒标准品（10⁸、10⁶、10⁴kIU/L）进行同批次和不同批次各10次重复检测，分别计算批内及批间Ct值的变异系数（CV）评价其检测重复性。然后，以湖南圣湘生物科技有限公司HBV核酸定量测定试剂盒为HBV DNA定量参照方法，申友公司HBV基因分型试剂盒为HBV基因分型参照方法，同定量与分型PCR法平行检测132例HBV感染者血清标本，评价自建定量和分型PCR法的准确性。最后，将132例HBV感染者分为无症状携带组（21例）、慢性乙型肝炎组（77例）、肝硬化组（25例）、肝癌组（9例），分析评价基因型、疾病进展的不同阶段与DNA载量间的相关性。

用自建定量与分型PCR法检测B、C基因型的灵敏度均为10³k IU/L；线性范围均为10³~10¹¹kIU/L；检测B基因型批内CV为1.51%~1.80%，批间CV为2.11%~3.03%，检测C基因型批内CV为1.79%~1.95%，批间CV为2.53%~2.91%；对其他病毒感染者和健康志愿者血清检测结果均为阴性。定量与分型PCR法检测132例HBV感染者的基因分型结果与HBV测序分型试剂盒总符合率为90.9%（120/132，Kappa=0.832，P<0.05）；其DNA定量结果[5.07（3.89~6.33）lg kIU/L]与HBV核酸定量测定试剂盒定量结果[5.19（4.15~6.32）lg kIU/L]有很好的相关性（R²=0.8477，P<0.05）。此外，定量与分型PCR法检出B基因型69例、C基因型51例、B/C混合基因型12例，DNA载量分别为4.54（3.83~6.17）、5.53（4.02~6.55）、4.58（3.68~4.98）lg kIU/L，C基因型感染者DNA水平高于B基因型和B/C混合基因型感染者（Z值分别为-2.195、-2.162，P均<0.05）；无症状携带组、慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组DNA载量分别为7.02（6.35~7.84）、4.94（4.16~6.25）、4.37（3.50~5.17）、3.45（3.25~4.92）lg kIU/L，无症状携带组DNA水平显著高于其他3组（Z值分别为-4.244、-4.568、-3.489，P均<0.001），慢乙型肝炎组DNA水平与肝硬化和肝癌组比较，差异均有统计学意义（Z值分别为-2.894、-2.413，P均<0.05），但肝硬化组与肝癌组的差异无统计学意义（Z=-0.995，P=0.335）。

建立的定量与分型PCR法准确、灵敏、特异，可同时进行HBV DNA的定量和基因分型检测。（中华检验医学杂志,2013,36:333-338）