【摘 要】
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目的:研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法:对大鼠盲肠进行结扎与穿刺(CLP),对肾脏组织切片进行HE染色,
【机 构】
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暨南大学第五附属医院,清远市人民医院重症医学科
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目的:研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法:对大鼠盲肠进行结扎与穿刺(CLP),对肾脏组织切片进行HE染色,并测定血清尿素氮和肌酐。通过Western blotting定量分析CLP大鼠肾脏损伤发生后不同时点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ、beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;体外用LPS诱导人近端肾小管上皮细胞株HK-2发生自噬,检测不同浓度LPS和不同刺激时间自噬相关分子LC3Ⅰ/Ⅱ和Akt蛋白磷酸化的表达情况;进一步使用PI3K抑制剂、Akt抑制剂和LPS刺激HK-2细胞观察自噬相关蛋白的表达情况及细胞的凋亡水平。结果:同对照组相比,CLP大鼠显微镜下可见肾损伤的典型病理改变,血清尿素氮和肌酐均有上升。CLP肾脏损伤发生后,自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、beclin-1含量及Akt磷酸化水平均有上升。LPS刺激HK-2细胞后,随着刺激浓度的增加,p-Akt(308)表达量逐渐提高,而LC3Ⅰ/Ⅱ及p-Akt(472)的表达量在10 mg/L LPS刺激组最高。随着刺激时间的延长,p-Akt(308)表达量逐渐提高;LC3Ⅰ/Ⅱ表达量同p-Akt(472)在刺激8 h时最高;使用PI3K抑制剂及Akt抑制剂后,LPS诱导的LC3表达显著下调,HK-2细胞凋亡明显增加。结论:CLP肾脏损伤发生时可以诱导自噬发生,PI3K/Akt信号通路在其中发挥重要调节作用。
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