重组人降钙素基因相关肽逆转录病毒对人骨髓间充质干细胞增殖与成骨活性的影响

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linli881203
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目的 将重组人降钙素基因相关肽α(hCGRPα)逆转录病毒载体(pLNCX2-hCGRPα)感染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),观察其对hBMSCs增殖与成骨活性的影响.方法 采用Ficoll淋巴细胞分离液梯度离心法获得自体原代hBMSCs并传代保存.将重组逆转录病毒pLNCX2-hCGRPα感染第2代hBMSCs.细胞分3组:(1)实验组:pLNCX2-hCGRPα感染hBMSCs.(2)空载体组:空载体pLNCX2感染hBMSCs;(3)正常对照组:正常培养hBMSCs,不给予特殊处理.实验7d采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测细胞内hCGRPα基因mRNA与蛋白表达,1 ~7d采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,14 d检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性值与培养液骨钙素含量,7d检测细胞层粘连蛋白(LN).结果 实验组细胞中表达hCGRPα mRNA,而空载体组和正常对照组细胞不表达.与空载体组和正常对照组比较,实验组细胞表现出较高增殖率(P<0.05).实验组细胞ALP活性值、LN、培养液骨钙素含量分别为(119.33±11.95) U/100 mg蛋白、(12.11±1.56) μg/L、(1.123 ±0.115) μg/L,均高于空载体组[(66.16±6.82) U/100 mg蛋白、(7.32±0.98)μg/L、(0.602 ±0.097) μg/L和正常对照组[(67.73±7.31) U/100 mg蛋白、(6.46±1.41) μg/L、(0.498±0.109) μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05),而空载体组和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 重组hCGRPα逆转录病毒成功转入hBMSCs,并表达hCGRPα基因而促进hBMSCs增殖和增强细胞的成骨活性。

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