目的:构建小鼠眼眶成纤维细胞TLR4的shRNA慢病毒干扰载体,研究TL4-/-的成纤维细胞对甲状腺相关性眼病的治疗作用和机制。方法:设计、构建、筛选小鼠眼眶成纤维细胞TLR4基因的最优干扰shRNA表达质粒,选择Gateway方法将质粒导入慢病毒表达载体中,使用重组慢病毒载体感染小鼠眼眶成纤维细胞,研究其对免疫炎性反应的负向调控能力,并在小鼠甲状腺眼病模型中采用沉默成纤维细胞TLR4基因的方法,观察其体内治疗效果。结果:筛选出具有最好基因静默效果的shRNA序列,导入慢病毒载体,病毒滴度为1.5×106TU/m L。转染慢病毒的Balb/c小鼠眼眶成纤维细胞能够负向调控免疫应答,抑制免疫炎症反应。在疾病动物模型中转染了干扰病毒载体实验组小鼠,其眼病发生发展情况均优于对照组。结论:成功获得了小鼠成纤维细胞TLR4-/-shRNA的慢病毒载体,转染了该载体的小鼠眼眶成纤维细胞能够抑制正向免疫应答,可以有效地抑制甲状腺眼病的发展,揭示干扰TLR4表达可能成为防治甲状腺眼病的生物诊疗措施。