【摘 要】
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目的 探讨艾地骨化醇（eldecalcitol,ED-71）对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61 （CYR61）表达的影响,。方法 首先,使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒（pcDNA3.1-CYR61组）及阴性对照pcDNA3.1质粒（pcDNA3.1-NC组）转染到人骨肉瘤细胞系（U2OS）中,通过RT-PCR和Western blot验
【机 构】
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空军军医大学第二附属医院唐都医院骨科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（82174266）；
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目的 探讨艾地骨化醇（eldecalcitol,ED-71）对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61 （CYR61）表达的影响,。方法 首先,使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒（pcDNA3.1-CYR61组）及阴性对照pcDNA3.1质粒（pcDNA3.1-NC组）转染到人骨肉瘤细胞系（U2OS）中,通过RT-PCR和Western blot验证转染效率。然后,将U2OS细胞分为对照组、ED-71组、ED-71+pcDNA3.1-NC组和ED-71+pcDNA3.1-CYR61组,对照组和ED-71组细胞未进行转染,ED-71+pcDNA3.1-NC组细胞转染pcDNA3.1-NC,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组细胞转染pcDNA3.1-CYR61。转染后,对照组细胞不做药物处理,其余3组细胞用含有5 nmol/L艾地骨化醇的1640培养基培养24 h。CCK-8法和集落形成实验测定U2OS细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR检测细胞中CYR61 mRNA水平,Western blot检测细胞中CYR61、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Fibronectin、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。结果 与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-CYR61组细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.001）。与对照组比较,ED-71组中CYR61的mRNA和蛋白表达水平降低（P＜0.001）,OD450nm值降低（P＜0.001）,集落数量降低（P＜0.001）,细胞凋亡率升高（P＜0.001）,Bax蛋白表达水平升高（P ＜0.001）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P ＜0.001）,迁移和侵袭细胞数降低（P ＜0.001）,MMP-2、MMP-9和Fibronectin蛋白表达水平降低（P＜0.001）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P＜0.001）,N-cadherin蛋白表达水平降低（P＜0.001）。与ED-71++pcDNA3.1-NC组比较,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组U2OS细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.001）,集落数量升高（P＜0.001）,OD450nm值升高（P＜0.001）,细胞凋亡率降低（P＜0.001）,Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高（P＜0.001）,迁移和侵袭细胞数升高（P＜0.001）,MMP-2、MMP-9和Fibronectin蛋白相对表达水平升高（P＜0.001）,E-cadherin蛋白表达水平降低（P ＜0.001）,N-cadherin蛋白表达水平升高（P＜0.001）。结论 艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移能力。
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