【摘 要】
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为快速鉴定临床上的副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）感染，本研究采用环介导等温扩增（LAMP）技术结合横向流动试纸条（LFD）测定法进行核酸扩增和结果的可视化判定。选择副猪嗜血杆菌inf B基因中保守序列设计5组环介导等温扩增引物，筛选最适引物组；用生物素和6-FAM标记内引物用于LAMP扩增反应，结合LFD建立了副猪嗜血杆菌LAMP-LFD快速检测方法，并测试该方法
【基金项目】
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国家自然科学资金项目（31520103917）；
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为快速鉴定临床上的副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）感染，本研究采用环介导等温扩增（LAMP）技术结合横向流动试纸条（LFD）测定法进行核酸扩增和结果的可视化判定。选择副猪嗜血杆菌inf B基因中保守序列设计5组环介导等温扩增引物，筛选最适引物组；用生物素和6-FAM标记内引物用于LAMP扩增反应，结合LFD建立了副猪嗜血杆菌LAMP-LFD快速检测方法，并测试该方法的特异性、灵敏度、重复性和临床应用效果。结果表明：1)优化后的LAMP在66℃下运行30 min, LFD可以在5 min内特异性、直观地检测到副猪嗜血杆菌；2)特异性强，与其他5种细菌无交叉反应；3)敏感度高，其最低检测浓度为1.285×10-12 ng/μL,较普通PCR方法灵敏度显著提高；4)采用该方法对52份临床样品进行检测，副猪嗜血杆菌阳性率为19.2%（10/52）,与LAMP检测结果的符合率为100%。综上，本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、灵敏、准确地应用于副猪嗜血杆菌的可视化检测，而且操作简单、仪器设备要求及检测成本低、耗时短，适用于基层养殖场副猪嗜血杆菌感染的临场、即时检测，具有较高的推广价值。
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