通过阵列式标签高通量测序高效鉴定点突变单克隆细胞

来源 :基础医学与临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ewtfgtwegv

【摘要】

：

目的建立阵列式标签标记的高通量测序方法并结合多克隆预筛选实现对点突变单克隆细胞株的高效鉴定。方法通过CRISPR/Cas9介导的同源重组修复(HDR)在K562细胞的rs826415位点引

【作者】

：

韩玲杨科薛征吕湘

【机构】

：

中国医学科学院基础医学研究所

【出处】

：

基础医学与临床

【发表日期】

：

2020年7期

【关键词】

：

CRISPR/Cas9 同源重组阵列式标签高通量测序克隆筛选 CRISPR/Cas9homologous recombinationarray tagged

【基金项目】

：

国家重点研发计划干细胞及转化研究专项(2016YFA0100603),国家自然科学基金(81670108),中国医学科学院医学与健康科技创新工程协同创新团队项目(2016-I2M-3-002)

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目的建立阵列式标签标记的高通量测序方法并结合多克隆预筛选实现对点突变单克隆细胞株的高效鉴定。方法通过CRISPR/Cas9介导的同源重组修复(HDR)在K562细胞的rs826415位点引入G到T点突变。侯选细胞按每孔10~20个的密度接种培养多克隆,以带有标签(barcode)的引物区分各多克隆细胞,PCR扩增含rs826415位点的区段,产物合并进行二代测序。生物信息学分析各多克隆细胞的同源重组率及插入/缺失率。将阳性率最高孔内的细胞进一步单克隆培养并鉴定基因型。结果通过CRISPR/Cas9同源重组

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