为研究红螯螯虾（Cherax quadricarinatus）卵黄蛋白原N端结构域（vitellogenin N domain, VitN）的生物学功能并获得具有免疫特异性的红螯螯虾VitN融合蛋白，试验根据红螯螯虾卵黄蛋白原的mRNA序列（GenBank登录号为AF306784.1）获得VitN mRNA序列（编码第42～585位氨基酸）,通过在线分析工具对红螯螯虾VitN进行生物信息学分析，并优化合成红螯螯虾VitN基因序列，构建重组表达质粒pET-28a-VitN,将其转化至大肠杆菌BL21（λDE3）感受态细胞中，经IPTG诱导，对红螯螯虾VitN融合蛋白进行表达、纯化、包涵体复性、Western-blot鉴定和浓度测定。结果表明：编码红螯螯虾VitN的氨基酸共544个，均为常见氨基酸，其中丙氨酸、缬氨酸和丝氨酸含量较多（占比分别为7.72%、7.72%和7.54%）,色氨酸含量最少（仅占0.92%）;红螯螯虾VitN的相对分子质量为64 681,理论等电点为8.69,共含有8 540个原子，分子式为C2671H4260N758O818S33,不稳定系数为31.49,脂肪系数为74.56,亲水性平均值为-0.45,亲水氨基酸数量明显多于疏水氨基酸数量；编码红螯螯虾VitN的氨基酸全部位于细胞膜外，不存在跨膜区；红螯螯虾VitN亚细胞定位在细胞外或细胞质内，不含常规信号肽，也不含Ⅰ型信号肽酶；红螯螯虾VitN共有67个磷酸化位点，其中丝氨酸磷酸化位点31个，苏氨酸磷酸化位点23个，酪氨酸磷酸化位点13个；红螯螯虾VitN的二级结构包括α-螺旋、β折叠、延伸链、无规则卷曲；三级结构包含具有脂质结合功能的lv-1n和lv-1c肽链结构，且呈现上下两个较为明显的区域，上半部分为sheet折叠结构富集区域，下半部分为α螺旋结构富集区域；在红螯螯虾第129～153位氨基酸和第396～402位氨基酸处各存在一个二硫键。优化后的红螯螯虾VitN基因片段大小约为1 650 bp;经连接、转化、诱导，获得了大小约为64.7 ku的融合蛋白，其在大肠杆菌BL21（λDE3）感受态细胞中的主要表达形式为包涵体；最佳诱导条件为37℃、250 r/min振荡培养至菌液的OD600值达到0.6时，加入诱导剂IPTG至终浓度为0.5 mmol/L,继续于37℃、250 r/min振荡培养4 h;包涵体用Ni-NTA柱纯化时以50 mmol/L咪唑洗脱液的洗脱效果为最佳；经Western-blot鉴定进一步确定该蛋白为目的蛋白；纯化的红螯螯虾VitN融合蛋白的最终浓度为0.45 mg/mL。说明初步对红螯螯虾VitN进行了生物信息学分析，并成功构建了重组表达质粒pET-28a-VitN,优化了表达系统及纯化方案，获得了具有免疫特异性的红螯螯虾VitN融合蛋白。