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目的
建立磁性分离法培养小鼠肺动脉平滑肌细胞的方法。
方法成年C57BL/6J小鼠无菌条件下自右心室注入含铁粉的琼脂糖后,取肺组织并切碎,胶原酶消化,然后用磁铁通过磁力吸引分离含铁粉的肺动脉并进行肺动脉平滑肌细胞原代培养,待细胞融合80%以上进行传代。显微镜下观察培养的肺动脉平滑肌细胞并进行免疫荧光染色鉴定。
结果原代培养1 d,显微镜下观察可见含铁的小血管碎片漂浮。培养3 d后可见长梭形细胞从含铁小血管周围爬出。培养7~10 d后可见细胞形态表现为长梭形、放射状,血管平滑肌细胞呈"峰-谷"状生长。免疫荧光染色显示培养的肺动脉平滑肌细胞平滑肌肌球蛋白重链阳性、平滑肌细胞特异性蛋白smoothelin阳性。
结论磁性分离法可以成功获得小鼠肺动脉平滑肌细胞,尤其是远端肺动脉平滑肌细胞。