【摘 要】
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目的克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛镁离子转运蛋白(magnesium transporter,MGT)基因(Do MGT1)并进行生物信息学和表达分析。方法采用RT-PCR和RACE技术,获得基因c DNA全长
【机 构】
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陕西中医学院药学院 陕西省中药基础与新药研究重点实验室,中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所,
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目的克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛镁离子转运蛋白(magnesium transporter,MGT)基因(Do MGT1)并进行生物信息学和表达分析。方法采用RT-PCR和RACE技术,获得基因c DNA全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特征;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR(q PCR)检测基因表达模式。结果克隆到Do MGT1(Gen Bank注册号KJ995532),c DNA全长1 625 bp,编码一条由425个氨基酸组成的肽链,相对分子质量47 400,等电点4.79;Do MGT1蛋白含有Cor A家族镁离子转运蛋白保守结构域(313~420)和镁离子转运蛋白MRS2/LPE10保守域(27~420);Do MGT1与多种植物MGTs基因一致性为46%~63%,编码蛋白与水稻Os MGTD、Os MGTE、Os MGTF等聚在一起,与At MGT4共同构成植物MGTs基因的一大类群;Do MGT1基因转录本在石斛根、茎、叶器官中为组成型表达,叶中相对表达量较高,为根中的3.46倍;茎次之,为根的1.54倍。结论成功克隆到一个镁离子转运蛋白基因Do MGT1,其转录本在叶中高的表达特征暗示该基因可能在铁皮石斛叶的生长发育中发挥重要作用。
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