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探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。
方法通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系，使细胞中GTPBP4基因沉默，观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通过qRT-PCR和蛋白质印迹法评估基因沉默效果及检测凋亡相关蛋白表达。应用MTT法检测转染后细胞的增殖变化。采用流式细胞术检测干扰GTPBP4基因表达后细胞凋亡变化。应用克隆形成实验检测细胞照射后放射敏感性变化。
结果GEO数据库分析表明GTPBP4基因在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001)。与空白对照组和阴性对照组相比，干扰组EC9706细胞的GTPBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(均P<0.001)，表明质粒成功转染EC9706细胞。MTT检测结果显示干扰组EC9706细胞增殖率受到显著抑制(P<0.001)。流式细胞术结果显示干扰组EC9706细胞凋亡率明显升高(P<0.001)，细胞凋亡明显增加(P<0.001)；凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3、Bax)表达明显升高，抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达下降(P<0.001、P＝0.001、P＝0.0014、P＝0.005)。克隆形成实验结果显示干扰组EC9706细胞放射增敏比1.716。
结论GTPBP4基因在人食管癌组织中高表达，RNAi技术可有效抑制EC9706细胞GTPBP4基因表达，从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强细胞对放射线的敏感性。