【摘 要】
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目的 通过原核表达,获得不带标签的NT-proBNP重组蛋白,并用其免疫新西兰大白兔,制备兔抗NT-proBNP抗体.方法 从重组菌pET-32a(+)-NT-proBNP提取重组质粒,通过PCR扩增出目的DN
【机 构】
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重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院检验科,重庆,400016
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目的 通过原核表达,获得不带标签的NT-proBNP重组蛋白,并用其免疫新西兰大白兔,制备兔抗NT-proBNP抗体.方法 从重组菌pET-32a(+)-NT-proBNP提取重组质粒,通过PCR扩增出目的DNA片段,插入pCold TF载体,转化入大肠埃希菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白.经镍柱亲和纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、镍柱亲和纯化,制备不带标签的纯蛋白质,并用临床商品化试剂盒验证其抗原性.用该蛋白质免疫新西兰大白兔制备抗体,western blot鉴定其特异性.结果 成功获得高纯度的不带标签的NT-proBNP蛋白,该蛋白质能被商品化的试剂盒识别.用该蛋白质免疫新西兰大白兔成功制备出高效价高特异的抗体.结论 成功制备高纯度的无标签NT-proBNP蛋白及其多克隆抗体,为NT-proBNP在临床上的广泛应用奠定了基础.
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