观察重组华支睾吸虫铁重链蛋白(CsFHC)对人肝星状细胞LX-2(简称LX-2细胞)的作用。
方法采用细胞培养方法,体外培养LX-2细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)检测不同浓度CsFHC重组蛋白[0(对照),1、2、5、10、20 nmol/L]刺激LX-2细胞48、72 h的细胞增殖活性,并通过流式细胞仪分析CsFHC重组蛋白对细胞周期的影响;采用半定量RT-PCR检测LX-2细胞活化相关基因I型胶原(Collagen I)、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ)和α-平滑肌肌动蛋白(αSMA)mRNA表达情况。
结果对照,1、2、5、10、20 nmol/L CsFHC重组蛋白对LX-2细胞的增殖活性有影响(48 h:0.987 ± 0.042、1.315 ± 0.105、1.298 ± 0.078、1.432 ± 0.089、1.781 ± 0.040、1.581 ± 0.056;72 h:1.050 ± 0.030、1.503 ± 0.111、1.671 ± 0.102、1.769 ± 0.123、1.927 ± 0.067、1.492 ± 0.081),组间比较差异有统计学意义(F = 1 892.133、534.136,P均< 0.05)。当CsFHC重组蛋白为1、2、5、10、20 nmol/L时,处于静止期/DNA合成前期(G0/G1)的细胞(74.93 ± 4.05、75.87 ± 4.16、76.73 ± 5.03、78.57 ± 5.51、74.90 ± 3.61)均高于对照组(54.90 ± 3.61,P均< 0.05);处于合成期(S)+ DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)的细胞(22.24 ± 3.06、24.13 ± 2.00、18.54 ± 1.53、18.71 ± 1.53、21.17 ± 3.06)均低于对照组(33.26 ± 2.65,P均< 0.05)。对照组,1、2、5、10、20 nmol/L CsFHC重组蛋白组Collagen I、Collagen Ⅲ、αSMA mRNA表达水平组间比较差异有统计学意义(48 h:F = 81.419、14.417、70.456;72 h:F = 79.224、50.461、41.872,P均< 0.05)。
结论CsFHC重组蛋白在体外可刺激LX-2细胞的增殖和活化,CsFHC参与华支睾吸虫致肝纤维化过程。