【摘 要】
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目的：建立一种准确、快速地检测地黄Rehmannia glutinosa Libosch.轮纹病病原真菌草茎点霉Phoma herbarum的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法。方法：基于GenBank数据库中草茎点霉的基因序列设计草茎点霉的特异性引物，并基于该引物制备重组质粒标准品，以标准品DNA优化qRT-PCR反应体系及构建qRT-PCR标准曲线。采用所设计的qRT-PCR体系及特异性
【机 构】
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河南中医药大学/河南省道地药材生态种植工程技术研究中心
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2017YFC1702800）；
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目的：建立一种准确、快速地检测地黄Rehmannia glutinosa Libosch.轮纹病病原真菌草茎点霉Phoma herbarum的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法。方法：基于GenBank数据库中草茎点霉的基因序列设计草茎点霉的特异性引物，并基于该引物制备重组质粒标准品，以标准品DNA优化qRT-PCR反应体系及构建qRT-PCR标准曲线。采用所设计的qRT-PCR体系及特异性引物，检测草茎点霉回接地黄叶盘后不同时间病原菌数量的动态变化。结果：设计得到的特异性引物PH.F10/PH.R10及所建立的qRT-PCR方法体系特异性强，敏感度高，检测地黄草茎点霉DNA的最低浓度为2.04×10-4ng/μL。接种后24～48 h（Ct值＜31.29）时草茎点霉开始侵染地黄，48 h后病情级别调查结果为1级，且随时间延续侵染量逐渐增加。结论：本研究所建立的qRT-PCR方法能对地黄病株中草茎点霉真菌数量进行快速、动态检测，可为地黄轮纹病的早期诊断和动态监测提供技术支持。
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