【摘 要】
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为获得可用于猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗体检测的重组抗原Cap蛋白,根据GenBank中发表的PCV20RF2序列设计物,以PCV2 JS株基因组为模板,PCR扩增出无核定
【机 构】
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江苏省动物疫病预防控制中心,南京农业大学动物医学院
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为获得可用于猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗体检测的重组抗原Cap蛋白,根据GenBank中发表的PCV20RF2序列设计物,以PCV2 JS株基因组为模板,PCR扩增出无核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的ORF2基因片段,插入质粒pET-30a(+)构建重组表达质粒pET-ORF2△NLS,IPTG可诱导该重组菌表达约27 ku大小的重组蛋白.进一步分析发现该蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式存在；镍柱亲和层析法纯化该蛋白,用PCV2阳性血清进行免疫印迹试验,结果发现纯化的重组蛋白能与PCV2抗体发生特异性反应,表明该纯化的蛋白具有很好的免疫反应原性,可用于临床样本中PCV2抗体的检测.
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