【摘 要】
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目的:检测TNP-470对内皮细胞增生的影响及其与碱性成纤维细胞生长因子的相互作用,并探讨其可能机制.方法:实验于2005-05/2006-10在沈阳医学院完成.采用本室改进的Jaffe法进行
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目的:检测TNP-470对内皮细胞增生的影响及其与碱性成纤维细胞生长因子的相互作用,并探讨其可能机制.方法:实验于2005-05/2006-10在沈阳医学院完成.采用本室改进的Jaffe法进行人脐静脉内皮细胞原代培养,细胞生长达亚融合状态后,换成无血清培养液使其停止生长.实验分组:依据施加的实验因素不同,将培养的人脐静脉内皮细胞分为4组:对照组(DMEM无血清)、TNP-470组(10-4 g/L)、碱性成纤维细胞生长因子组(500 μg/L)、碱性成纤维细胞生长因子+TNP-470组.实验评估:采用四甲基偶氮唑盐比色分析测定各组内皮细胞吸光度,流式细胞计数仪检测内皮细胞周期各时相相对细胞数,免疫组织化学SABC法检测内皮细胞中核因子Kappa B p65和ki-67蛋白的表达阳性率.结果:①人脐静脉内皮细胞的生长活性:TNP-470显著抑制内皮细胞增生;碱性成纤维细胞生长因子显著刺激内皮细胞增生,与对照组相比,差异显著(0.119±0.002,0.168±0.004,0.138±0.003,P＜0.05).②内皮细胞周期各时相相对细胞数:TNP-470阻滞内皮细胞进入增殖期,使G0G1期内皮细胞比例上升,S期+G2/M期比例下降;而碱性成纤维细胞生长因子具有很强的促内皮细胞分裂增殖活性,使G0/G1期内皮细胞比例减少,S期+G2/M期比例增加,与对照组相比,差异显著(P＜0.05).③各组人脐静脉内皮细胞中NF-KB p65蛋白及Ki-67蛋白的表达阳性率:对照组人脐静脉内皮细胞中NF-KB p65蛋白呈棕褐色染色、ki-67极少表达;TNP-470可显著降低碱性成纤维细胞生长因子诱导的内皮细胞核内NF-kB p65蛋白及Ki-67蛋白的表达,与碱性成纤维细胞生长因子组比较,差异显著[NF-kB p65蛋白:(16.200±1.344)%,(68.400+1.204)%;Ki-67蛋白:(1.500 ～0.813),(65.700±1.113)%,P＜0.05].结论:TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制内皮细胞分裂与增殖;TNP-470抑制成纤维细胞生长因子诱导的内皮细胞增生与其影响内皮细胞中NF-kB的表达有关.
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