口蹄疫病毒结构蛋白VP1上B细胞表位的筛选鉴定

来源 :华北农学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chen19881220
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以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增结构蛋白VP1基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF72 VP1的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析结构蛋白VP1的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位肽段进行筛选鉴定,结果显示,表位VP1a和VP1d为病毒株AF72结构蛋白VP1的优势B细胞表位,该结果为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供有价值的参考依据.“,”Foot-and-mouth disease virus strain AF72 RNAs were used as templates for RT-PCR to amplify the VP1 gene.The purified PCR products were cloned into pGEM-T easy vectors and transformed into E. coli JM109.The positive recombinant plasmids identified by electrophoresis,PCR, and Eco R I cleavage were sequenced. The nucleotide and were obtained by comparing with the full-length sequence of the other reference strains. Potential B-cell epitopes of VP1 were predicted and epitope peptide segments were synthesized. They were identified by indirect ELISA. The result showed that VPla and VPld were predominant B-cell epitope of VP1, which provided valuable information for further study on the vaccine of FMD.
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