目的构建增强型绿色荧光蛋白(eGFP)标记的甲胎蛋白(AFP)的融合蛋白,并对其稳定性和测量特性进行分析。方法从pcDNA3.0质粒中扩增eGFP序列,插入质粒PET28a,构建eGFP表达质粒PET28a-eGFP。根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中的AFP编码序列,应用序列合成方法合成AFP编码序列,并加入连接eGFP的铰链序列,与eGFP序列链接,构建表达质粒PET28a-eGFP-AFP。分别表达和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP,分析重组蛋白的荧光特性及稳定性。结果成功构建和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP,荧光光谱分析显示其激发和发射光谱一致。最佳激发波长和发射波长分别为450和509 nm,且荧光可以稳定12个月。表达的eGFP-AFP蛋白可以与常规测定AFP的免疫试剂发生反应。结论构建表达的重组蛋白eGFP-AFP的荧光特性与eGFP蛋白一致,没有光谱特性变化,并可与常规AFP测定试剂发生反应,为研究eGFP标记的AFP用于校准品和质控品的研究奠定基础。