抗犬细小病毒单链抗体库构建及其亲和力检测

来源 :东北农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dd100

【摘要】

：

为获得高亲和力抗犬细小病毒单链抗体，构建抗犬细小病毒（CPV）细菌展示单链抗体文库。研究提取犬脾脏总RNA，反转录cDNA，以此为模板，分别扩增犬抗体VH和VL编码序列，插入克隆载体pTlink

【作者】

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李德山车瑞香郭瑞王宇阳黄涛郭笑辰任桂萍

【机构】

：

东北农业大学生命科学学院

【出处】

：

东北农业大学学报

【发表日期】

：

2017年11期

【关键词】

：

CPV 单链抗体流式细胞术亲和力 Canine parvovirus single chain antibody flow cytometry bac

【基金项目】

：

基金项目:国家重点研发计划项目(2016YFD0501003)

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为获得高亲和力抗犬细小病毒单链抗体，构建抗犬细小病毒（CPV）细菌展示单链抗体文库。研究提取犬脾脏总RNA，反转录cDNA，以此为模板，分别扩增犬抗体VH和VL编码序列，插入克隆载体pTlinker。利用SfiⅠ酶切位点将scFv基因构建至细菌展示载体pBSD中，将重组质粒电转化入E.coliDH5α构建pBFD-scFv细菌展示库。通过标记FITC的VP2蛋白，利用流式细胞术筛选12株阳性scFv。将12株scFv基因分别插入pET-28a，构建重组表达质粒pET28a-scFv。转化到E.coliRo

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