探索血管内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS)基因多态性对其产生一氧化氮能力的影响及其与缺血性股骨头坏死(ANFH)发病机制的相关性。
方法分别将含894G和894T的eNOS全长CDS片段亚克隆到慢病毒表达载体，转染到血管内皮细胞(HUVEC)，在不同时间点检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)和鸟苷酸环化酶(cGMP)的含量；用脂质体介导荧光素酶标记的报告质粒pNF-κB-luc与内参对照质粒pRL-TK共转染经LV-eNOS-894G和LV-eNOS-894T及对照慢病毒(LV-NC)转染的HUVEC细胞，待48 h后Western blot法检测各组HUVEC细胞内核因子-κB(NF-κB)、eNOS的蛋白表达。将上述各组HUVEC细胞分别与人成骨细胞hFOB1.19共培养，不同时间点检测细胞培养上清中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的浓度。
结果转染eNOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中NO含量和cGMP的含量明显高于空白对照组和空载体组，且894G组NO和cGMP含量显著高于894T组(P<0.01)；与空白对照组相比，转染了eNOS基因的细胞中NF-κB/p65和eNOS蛋白表达水平显著增多，且894G组显著高于894T组；上述各组HUVEC细胞分别与hFOB1.19成骨细胞共培养，在同一时间点，转染eNOS基因(含894G或894T)全长表达慢病毒的细胞培养上清中ALP和OCN浓度明显高于空白对照组和空载体组，且894G组的ALP和OCN浓度显著高于894T组。
结论eNOS基因外显子G894T变异通过eNOS-NO通路使血管内皮细胞产生的NO和cGMP下降，影响了NF-κB/p65和eNOS蛋白的表达水平，使骨组织血管供血减少、成骨细胞活性下降，可能是导致股骨头坏死的致病机制之一。