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目的:从人肺腺癌细胞系A549及H1299中分离富集含肿瘤干细胞的细胞球并鉴定其生物学特性。方法:用无血清悬浮培养的方法从人肺腺癌A549及H1299细胞株中富集得到肿瘤细胞球。将肿瘤细胞球传代扩增,体外利用CCK-8法、平皿克隆以及Transwell小室实验,研究细胞球的增殖情况、自我更新和侵袭转移能力;通过RT-PCR检测干细胞特异性转录因子Oct4、Nanog基因表达情况;体内利用裸鼠移植瘤形成实验研究肺癌细胞球的成瘤能力。鉴定细胞球的肿瘤干细胞特性。结果:在无血清悬浮培养下,A549及H1299细胞株3~6天后能形成稳定传代的肿瘤悬浮球,悬浮球的体外自我更新、克隆形成和侵袭转移等能力均高于其亲本细胞(P<0.05);干细胞核心基因Oct4和Nanog的mRNA表达水平明显升高(P<0.05);A549悬浮球可以明显提高裸鼠体内成瘤能力。结论:通过无血清悬浮培养法可有效富集A549及H1299细胞系中的干细胞成分,该法可成为快速易行构建肺腺癌干细胞模型的方法。